珍稀濒危植物五小叶槭ISSR-PCR反应体系的建立和优化

郝云庆; 罗晓波; 王晓玲

doi:10.16779/j.cnki.1003-5508.2018.05.004

珍稀濒危植物五小叶槭ISSR-PCR反应体系的建立和优化

doi: 10.16779/j.cnki.1003-5508.2018.05.004

详细信息

成都信息工程大学资源环境学院，四川成都 610225;四川省自然资源科学研究院，四川成都 610041;峨眉山生物资源实验站，四川峨眉山 614201;凉山州劳动职业技术学校，四川西昌615000

作者简介:
郝云庆(1976-),男,副教授,主要从事环境保护监测与生物多样性保护等研究工作。e-mail:Haoyunqing@cuit.edu.cn

基金项目:
四川省科技厅科技支撑计划“五小叶槭种质资源抢救性收集、保存、繁育研究（2014NZ0109）”；成都信息工程大学科研基金资助（KYTZ201746）。
中图分类号: S792.35

Establishment and Optimization of ISSR-PCR Reaction System for Acer pentaphyllum

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College of Resources and Environment, Chengdu University of Information Technology, Chengdu 610225, Sichuan, China;Sichuan Academy of Natural Resource Sciences, Chengdu 610024, Sichuan, China;Emei Mountain Resource Experimental Station, Mount Emei 614201, China;Liangshan Vocational and Technical School, Xichang 615000, Sichuan, China

摘要: 五小叶槭为珍稀濒危植物，在研究被子植物的系统发育和古地理、古气候等方面具有重要的科学价值。本研究采用2XTaqMaster Mix，综合考虑Taq酶、Mg²⁺和dNTPs，对影响五小叶槭ISSR-PCR反应的3个因素（DNA模板、引物和Master Mix）进行3水平正交试验，从而优化出五小叶槭ISSR-PCR反应最佳体系。结果表明，引物用量对反应结果影响最大，其次为DNA模板，2XTaqMaster Mix对反应结果影响最小。最佳反应体系（25μL）为:DNA模板（50ng·μL^-1）1μL，引物2μL，2XTaqMaster Mix 13.5μL。
- 五小叶槭;
- ISSR-PCR反应体系优化;
- 引物筛选;
- 正交设计
Abstract: Acer pentaphyllum is a kind of rare and endangered plants and it has important scientific value in studying angiosperm's phylogeny,paleogeography and paleoclimate.It this study,2XFaq Master Mix was adopted and the effect of Taq polymerase,dNTPs and Mg²⁺ were considered aiming to establish and optimize the best ISSR-PCR reaction system for Acer pentaphyllum.The results showed that the most remarkable factor was primers,followed by DNA template,and 2X Master Mix had the least effect on the reaction result.The optimum reaction system (25 μL) was 1 μL of DNA template (50 ng·μL^-1),2 μL of primer and 13.5 μL of 2XTaq Master Mix.
- Acer pentaphyllum;
- Optimization of ISSR-PCR system;
- Primers screening;
- Orthogonal design

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珍稀濒危植物五小叶槭ISSR-PCR反应体系的建立和优化

doi: 10.16779/j.cnki.1003-5508.2018.05.004

成都信息工程大学资源环境学院，四川成都 610225;四川省自然资源科学研究院，四川成都 610041;峨眉山生物资源实验站，四川峨眉山 614201;凉山州劳动职业技术学校，四川西昌615000

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郝云庆(1976-),男,副教授,主要从事环境保护监测与生物多样性保护等研究工作。e-mail:Haoyunqing@cuit.edu.cn

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作者简介: 郝云庆(1976-),男,副教授,主要从事环境保护监测与生物多样性保护等研究工作。e-mail:Haoyunqing@cuit.edu.cn

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郝云庆(1976-),男,副教授,主要从事环境保护监测与生物多样性保护等研究工作。e-mail:Haoyunqing@cuit.edu.cn

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