用微信扫码二维码

分享至好友和朋友圈

WE ARE COMMITTED TO REPORTING THE LATEST FORESTRY ACADEMIC ACHIEVEMENTS

留言板

尊敬的读者、作者、审稿人, 关于本刊的投稿、审稿、编辑和出版的任何问题, 您可以本页添加留言。我们将尽快给您答复。谢谢您的支持!

姓名
邮箱
手机号码
标题
留言内容
验证码

高效液相色谱法测定不同开花时期大马士革III玫瑰(Rosa damascene tyigintipetala)花青素种类及含量

刘雷 陈黎 李华 黄怡 牟秋雨 缑芸莎 李志鹏

刘雷, 陈黎, 李华, 等. 高效液相色谱法测定不同开花时期大马士革III玫瑰( Rosa damascene tyigintipetala )花青素种类及含量[J]. 四川林业科技, 2020, 41(4): 58−63 doi: 10.12172/202004260003
引用本文: 刘雷, 陈黎, 李华, 等. 高效液相色谱法测定不同开花时期大马士革III玫瑰( Rosa damascene tyigintipetala )花青素种类及含量[J]. 四川林业科技, 2020, 41(4): 58−63 doi: 10.12172/202004260003
Liu L, Chen L, Li H, et al. Dertermination of anthocyanidin composition and content from Rosa damascene tyigintipetala at different flowering periods by HPLC[J]. Journal of Sichuan Forestry Science and Technology, 2020, 41(4): 58−63 doi: 10.12172/202004260003
Citation: Liu L, Chen L, Li H, et al. Dertermination of anthocyanidin composition and content from Rosa damascene tyigintipetala at different flowering periods by HPLC[J]. Journal of Sichuan Forestry Science and Technology, 2020, 41(4): 58−63 doi: 10.12172/202004260003

高效液相色谱法测定不同开花时期大马士革III玫瑰(Rosa damascene tyigintipetala)花青素种类及含量


doi: 10.12172/202004260003
详细信息
    作者简介:

    刘雷(1980—),男,副研究员,硕士,33020897@qq.com

    通讯作者: chenli167541@aliyun.com
  • 基金项目:  四川省科技厅科技支撑计划(2016NZ0058);四川省教育厅重点项目(16ZA0323);绵阳市科技局科技攻关计划(11F001)

Dertermination of Anthocyanidin Composition and Content from Rosa damascene tyigintipetala at Different Flowering Periods by HPLC

More Information
    Corresponding author: chenli167541@aliyun.com
  • 摘要: 本实验采用HPLC法对大马士革III玫瑰(Rosa damascene tyigintipetala)蕾期、初开期、盛开期和盛开末期4个开花时期中6种主要花青素(飞燕草色素、矢车菊色素、天竺葵色素、芍药素、锦葵色素、矮牵牛色素)同时进行测定。采用V(无水乙醇)∶V(水)∶V(盐酸)=2∶1∶1溶液超声提取样品中花青苷30 min,并于沸水浴中水解1 h。测定的色谱条件为Agilent ZORBAX SB-C18(4.6 mm×250 mm,5 μm),流动相为1%甲酸水溶液和1%甲酸乙腈溶液,流速0.8 mL/min,检测波长530 nm,柱温35 ℃。结果表明:大马士革III玫瑰4个开花时期中均检出了矢车菊色素和天竺葵色素,方差分析结果表明两类花青素不同开花时期含量差异达到极显著水平(p<0.01);两类花青素含量均随开花过程和花瓣褪色而降低;矢车菊色素含量在不同开花时期均占绝对优势。同时,本研究建立的大马士III玫瑰花青素的提取和检测方法,该方法简便、快速、稳定且重现性好,可作为大马士革Ⅲ玫瑰及其他植物源性材料中飞燕草色素、矢车菊色素、天竺葵色素、芍药素、锦葵色素、矮牵牛色素等六种花青素的有效测定方法。
  • 表  1  流动相梯度洗脱条件

    Tab.  1  Gradient elution conditions of the flow phase

    时间
    Time
    1%甲酸水溶液
    1% Formic acid solution
    1%甲酸乙腈溶液
    0.1% Formic
    Acid-Acetonitrlle
    流量
    rate of flow
    /(mL·min−1
    0.0092.08.00.8
    2.0092.08.00.8
    4.0088.012.00.8
    7.0082.018.00.8
    12.0080.020.00.8
    14.0075.025.00.8
    17.0070.030.00.8
    20.0055.045.00.8
    22.0020.080.00.8
    24.0092.08.00.8
    30.0092.08.00.8
    下载: 导出CSV

    表  2  6种花青素的加样回收率

    Tab.  2  Recovery rate of 6 anthocyanins from samples

    花青素类型
    Anthocyanin type
    平均回收率
    Average Recovery/%
    相对标准偏差
    RSD/%
    飞燕草色素92.91.63
    矢车菊色素96.61.87
    矮牵牛色素91.10.69
    天竺葵色素88.00.34
    芍药素91.10.85
    锦葵色素84.20.56
    下载: 导出CSV

    表  3  不同开花时期大马士革III玫瑰花青素组分含量方差分析结果

    Tab.  3  Variance analysis of anthocyanin contents from Rosa damascene tyigintipetala at different flowering periods

    花青素
    Anthocyanin
    蕾期
    Unfold-petal Stage
    初开期
    Initial-flowering Stage
    盛开期
    Full-flowering Stage
    盛开末期
    Flowering-wilting Stage
    飞燕草色素/(mg·kg−10.000.000.000.00
    矢车菊色素/(mg·kg−1156.43Aa131.45Bb104.05Cc84.17Dd
    矮牵牛色素/(mg·kg−10.000.000.000.00
    天竺葵色素/(mg·kg−14.92ABab5.23Aa4.68Bb3.63Cc
    芍药素0.000.000.000.00
    锦葵色素/(mg·kg−10.000.000.000.00
      注:采用LSD法对同一行的数据进行比较,同一行的不同小写字母表示差异显著(P<0.05),同一行的不同大写字母表示差异极显著(P<0.01)。
    下载: 导出CSV
  • [1] 王辉,姚雷. 油用玫瑰国内外发展现状和研究进展[J]. 香料香精化妆品,2012,2:47−51. doi: 10.3969/j.issn.1000-4475.2012.01.012
    [2] 张睿,魏安智,杨途熙,等. 商周产大马士革玫瑰精油研究[J]. 西北植物学报,2005,25(7):1477−1479. doi: 10.3321/j.issn:1000-4025.2005.07.035
    [3] 徐云,苏春江. 攀西地区大马士革Ⅲ玫瑰引种栽培及产业化前景[J]. 山地学报,2006,5:636−640. doi: 10.3969/j.issn.1008-2786.2006.05.020
    [4] 陈燚格,陈芳清,谢总强,等. 鄂西地区大马士革Ⅲ玫瑰的引种栽培[J]. 中国农学通报,2012,28(16):225−232. doi: 10.11924/j.issn.1000-6850.2012-0341
    [5] 孙建勇. 保加利亚大马士革玫瑰扦插技术[J]. 现代农村科技,2009(16):29. doi: 10.3969/j.issn.1674-5329.2009.16.030
    [6] 唐晖,詹艳红,杨芷秋,曹受金,黄树兵. 大马士革玫瑰嫩枝扦插繁殖技术研究[J]. 现代农业,2017(12):86−87. doi: 10.3969/j.issn.1008-0708.2017.12.065
    [7] 李莉云,刘兴乐,杨青,谢捷,余华强. 大马士革玫瑰嫩枝分段扦插繁殖试验[J]. 湖北农业科学,2017,56(18):3481−3483.
    [8] 任君安,杨丽娜,王雁,任建武. 响应面分析法优化保加利亚玫瑰挥发油提取工艺[J]. 食品工业科技,2013,34(15):196−200.
    [9] 周围,王文军,刘倩倩. 基于GC-MS与代谢组学探讨产地对大马士革玫瑰油化学组成的影响[J]. 香料香精化妆品,2019(4):1−6. doi: 10.3969/j.issn.1000-4475.2019.04.001
    [10] 殷丽琴,彭云强,钟成,付绍红,杨进,黄敏,余勤,韦献雅,牛应泽. 高效液相色谱法测定8个彩色马铃薯品种中花青素种类和含量[J]. 食品科学,2015,36(18):143−147. doi: 10.7506/spkx1002-6630-201518026
    [11] 肖伟,张铭芳,张秀海. 百合花青素合成调控的研究进展[J]. 北方园艺,2018(20):154−162.
    [12] 赵昶灵,郭维明,陈俊愉. 植物花色形成及其调控机理[J]. 植物学通报,2005(1):70−81.
    [13] 胡莉,仲伶俐,毛建霏,等. 高校液相色谱测定粮食、蔬菜和水果中的花青素[J]. 分析实验室,2012,31(12):43−47.
    [14] 王文君,向灿辉,陈阳,等. 紫番薯原花青素的热回流法提取技术研究[J]. 食品工业,2011,32(8):54−56.
    [15] 曹振恒,王亚明,郭会仙. 天然植物有效成分提取分离技术研究进展[J]. 河北化工,2007,30(3):7−10, 33. doi: 10.3969/j.issn.1003-5059.2007.03.003
    [16] 张洁, 王亮生, 高锦明, 李圣波, 徐彦军, 李崇晖, 杨瑞珍. 贴梗海棠花青苷组成及其与花色的关系. 园艺学报, 2011, 38(3): 527.534.
    [17] GROTEWOLD E. The genetics and biochemistry of floral pigments[J]. Annual review of plant biology, 2006, 57(0): 761−780.
    [18] NICHOLLS E, IBARRA N H. Bees associate colour cues with differences in pollen rewards[J]. The Journal of Experimental Biology, 2014, 217(15): 2783−2788. doi: 10.1242/jeb.106120
    [19] BIOLLEY J P, JAY M. Anthocyanins in modern roses: chemical and colorimetric features in relation to the colour range[J]. Journal of Experimental Botany, 1993, 44(11): 1725−1734. doi: 10.1093/jxb/44.11.1725
    [20] SCHMITZER V, VEBERIC R, OSTERC G, et al. Changes in the phenolic concentration during flower development of rose‘KORcrisett’[J]. Journal of the American Society for Horticultural Science, 2009, 134(5): 491−496. doi: 10.21273/JASHS.134.5.491
  • [1] 李芳, 周颖, 杨莹, 张家春.  黄柏浸提液对白及锈病防治效果及其机制的研究 . 四川林业科技, 2024, 45(2): 1-6. doi: 10.12172/202310070001
    [2] 刘颖, 张喆, 李翔宇, 马红艳, 黄秋霞.  以开花植物为主的蝶类多样性生境环境营造 . 四川林业科技, 2023, 44(3): 54-63. doi: 10.12172/202208220002
    [3] 唐敏, 练东明, 余英, 景文祥, 杨柴.  不同微量元素和土壤酸碱性对油樟叶1,8-桉叶油素含量的影响 . 四川林业科技, 2023, 44(6): 101-104. doi: 10.12172/202301110001
    [4] 王鑫, 魏琴, 莫开林.  油樟高产1,8-桉叶油素内生细菌发酵条件优化 . 四川林业科技, 2021, 42(5): 69-72. doi: 10.12172/202102040003
    [5] 任君芳, 张利, 刘建霞, 单凤娇, 刘千里, 李昌玉.  东方百合‘Vivian’高效离体快繁体系的建立 . 四川林业科技, 2020, 41(6): 84-88. doi: 10.12172/202009010001
    [6] 汤小娟, 杨瑶君, 罗朝兵, 龙文聪, 付春.  长足大竹象成虫各段肠道纤维素酶活性比较 . 四川林业科技, 2020, 41(2): 118-125. doi: 10.12172/201912260004
    [7] 何慧, 叶垚君, 杨瑶君, 付春.  长足大竹象幼虫肠道纤维素酶活性研究 . 四川林业科技, 2020, 41(2): 126-132. doi: 10.12172/202003090005
    [8] 曾全, 陈志宏, 王戌勃, 肖银波, 杨远亮.  川北地区核桃介壳虫的鉴定及最适防治时期研究 . 四川林业科技, 2020, 41(4): 8-12. doi: 10.12172/202004010002
    [9] 龚大刚, 杜鸿, 曲都, 郑胜眉, 蔡晓明.  不同桑品种桑椹花青素及可溶性糖含量差异研究 . 四川林业科技, 2020, 41(4): 64-68. doi: 10.12172/202004130001
    [10] 梁剑, 严泉谋, 缪毓, 蒋雪梅.  不同浓度生根液对油橄榄扦插生根情况的影响 . 四川林业科技, 2019, 40(4): 100-103. doi: 10.16779/j.cnki.1003-5508.2019.04.020
    [11] 郭亮, 李晓铁, 秦丽凤.  桂北地区青钱柳不同时期活性成分分析 . 四川林业科技, 2019, 40(6): 81-84,114. doi: 10.16779/j.cnki.1003-5508.2019.06.015
    [12] 罗晓波, 熊皎, 罗艳.  核桃凋落叶浸提液和腐解液对萝卜种子萌发及其生理特性的影响 . 四川林业科技, 2018, 39(6): 58-61. doi: 10.16779/j.cnki.1003-5508.2018.06.013
    [13] 李姝江, 彭娇洋, 朱涵明月, 刘倩, 王诗玮, 朱天辉, 黄祖惠, 吴继云, 张霞.  莱氏野村菌(Nomuraearileyi)固液双相发酵配方研究 . 四川林业科技, 2017, 38(5): 33-37. doi: 10.16779/j.cnki.1003-5508.2017.05.007
    [14] 何明波, 杨明府, 何林炎.  广元油橄榄大枝扦插高效育苗技术 . 四川林业科技, 2017, 38(3): 162-164. doi: 10.16779/j.cnki.1003-5508.2017.03.039
    [15] 周建华, 韦卫, 赵莉蔺, 肖银波, 范成治, 贾玉珍, 马娟.  蜀柏毒蛾性信息素及其林间诱集效果初步研究 . 四川林业科技, 2017, 34(6): 9-12. doi: 10.16779/j.cnki.1003-5508.2017.06.003
    [16] 林子歆.  新时期宜宾林业产业发展的思考 . 四川林业科技, 2016, 37(2): 123-125. doi: 10.16779/j.cnki.1003-5508.2016.02.028
    [17] 于雷.  杨树不同无性系越冬时期含水率变化分析研究 . 四川林业科技, 2016, 37(1): 46-50. doi: 10.16779/j.cnki.1003-5508.2016.01.009
    [18] 徐玉梅, 杨德军, 胥佳, 邱琼, 牛毅, 陈勇.  西双版纳高效生态茶园创新种植模式初探 . 四川林业科技, 2014, 35(6): 102-104. doi: 10.16779/j.cnki.1003-5508.2014.06.023
    [19] 林强, 任君芳, 冉晓潇, 柳成益, 韩灯.  块菌菌根苗高效交叉感染技术研究 . 四川林业科技, 2013, 34(4): 25-26. doi: 10.16779/j.cnki.1003-5508.2013.04.007
    [20] 黄萍.  苦笋高效丰产栽培技术 . 四川林业科技, 2013, 34(4): 111-112. doi: 10.16779/j.cnki.1003-5508.2013.04.031
  • 加载中
  • 计量
    • 文章访问数:  656
    • HTML全文浏览量:  214
    • PDF下载量:  20
    • 被引次数: 0
    出版历程
    • 收稿日期:  2020-04-26
    • 网络出版日期:  2020-06-28
    • 刊出日期:  2020-08-17

    高效液相色谱法测定不同开花时期大马士革III玫瑰(Rosa damascene tyigintipetala)花青素种类及含量

    doi: 10.12172/202004260003
      作者简介:

      刘雷(1980—),男,副研究员,硕士,33020897@qq.com

      通讯作者: chenli167541@aliyun.com
    基金项目:  四川省科技厅科技支撑计划(2016NZ0058);四川省教育厅重点项目(16ZA0323);绵阳市科技局科技攻关计划(11F001)

    摘要: 本实验采用HPLC法对大马士革III玫瑰(Rosa damascene tyigintipetala)蕾期、初开期、盛开期和盛开末期4个开花时期中6种主要花青素(飞燕草色素、矢车菊色素、天竺葵色素、芍药素、锦葵色素、矮牵牛色素)同时进行测定。采用V(无水乙醇)∶V(水)∶V(盐酸)=2∶1∶1溶液超声提取样品中花青苷30 min,并于沸水浴中水解1 h。测定的色谱条件为Agilent ZORBAX SB-C18(4.6 mm×250 mm,5 μm),流动相为1%甲酸水溶液和1%甲酸乙腈溶液,流速0.8 mL/min,检测波长530 nm,柱温35 ℃。结果表明:大马士革III玫瑰4个开花时期中均检出了矢车菊色素和天竺葵色素,方差分析结果表明两类花青素不同开花时期含量差异达到极显著水平(p<0.01);两类花青素含量均随开花过程和花瓣褪色而降低;矢车菊色素含量在不同开花时期均占绝对优势。同时,本研究建立的大马士III玫瑰花青素的提取和检测方法,该方法简便、快速、稳定且重现性好,可作为大马士革Ⅲ玫瑰及其他植物源性材料中飞燕草色素、矢车菊色素、天竺葵色素、芍药素、锦葵色素、矮牵牛色素等六种花青素的有效测定方法。

    English Abstract

    • 大马士革玫瑰(Rosa damascene Miller)属蔷薇科、蔷薇属的植物,所产玫瑰精油纯正、香气浓郁、质量稳定,符合ISO9842国际质量标准,是世界上最好的玫瑰精油生产品种之一,精油价格高于黄金数倍,被誉为“液体黄金”,在化妆品、食品、药品及保健品等领域具有广泛用途[1-2]。大马士革Ⅲ玫瑰(Rosa damascene tyigintipetala)是从大马士革玫瑰中、筛选所得优良专用油用玫瑰品种,既具有大马士革玫瑰的优点,又具有抗病力强,适应性广,产花量和出油率高的特点,广泛用于栽培生产。关于大马士革玫瑰,先前的研究主要集中在该品种的扦插育苗[3-5]、组培条件的筛选和优化以及无性繁殖体系的建立[6-7]、挥发油的提取及组分的分离和鉴定[8-9]

      花青素是一类广泛在于石竹类属、大丽花属、蔷薇属及金鱼草属等植物中的水溶性色素,属类黄酮化合物,具有抗氧化、抗突变等多种生物学功能,其中广泛分布且常见的为6种,即天竺葵色素、矢车菊色素、飞燕草色素、芍药色素、矮牵牛色素和锦葵色素[10-11]。花青素在自然界中主要以糖苷化和酰基化方式存在,不同的结合方式形成种类复杂、品种众多的花色苷。花色表现的生化机制是由于花瓣内细胞所含的类黄酮物质(花青素)、胡萝卜素和生物碱的数量与含量的差异[12]。由于花色苷的种类众多,要建立全部花色苷的检测方法十分困难,但是将花色苷水解后形成花青素单体后,进行检测,则变得简单可行[13]

      大马士革III玫瑰花青素种类和含量测定尚未有相关研究报的、呈色机理更是未知。本实验采用盐酸和甲醇作为溶剂超声提取法对花青苷进行提取,沸水浴法对花青苷水解,高效液相色谱法对大马士革III玫瑰蕾期、初开期、盛开期和盛开末期4个不同开花时期6种主要花青素(飞燕草色素、矢车菊色素、天竺葵色素、芍药素、锦葵色素、矮牵牛色素)种类及含量进行分析,拟建立大马士革III玫瑰和其他植物源性主要花青素有效、稳定的测定方法,分析大马士革III玫瑰不同开花时期花青素的种类和含量,为大马士革III玫瑰的呈色机理研究以及花色育种奠定基础。

      • Agilent 1260高效液相色谱仪(美国Agilent 公司),配二极管阵列检测器(DAD), Arium® comfort纯水仪(德国赛多利斯集团),电子分析天平(德国Sartorius bsa224s-cw型万分之一),KQ2200型超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司),匀浆机(德国IKA公司),水浴锅(北京市永光明医疗仪器厂)。

        飞燕草色素纯物质Extrasynthese,矢车菊色素纯物质Edqm,天竺葵色素纯物质Extrasynthese,芍药素纯物质Extrasynthese,锦葵色素纯物质ChromaDex,矮牵牛色素纯物质Extrasynthese。甲醇(色谱纯,北京迪科马科技有限公司),甲酸、无水乙醇和盐酸(分析纯,成都市科龙化工试剂厂),水为超纯水,其他试剂均为分析纯。

      • 从四川省绵阳市游仙区柏林镇万山柏林玫瑰专业合作社取回的大马士革III玫瑰材料,经绵阳师范学院生命科学与技术学院罗明华教授鉴定为蔷薇科蔷薇属植物大马士革Ⅲ玫瑰(Rosa damascene tyigintipetala)。2017年5月在晴天的上午,选取4个开花时期(蕾期、初开期、盛开期和盛开末期)的花蕾作为研究材料,来源于生长势一致,花蕾均匀,花色一致的4年生植株的4个单株,每株分散选取10朵花,将每个单株10朵花的花瓣全部取下,3次生物学重复,用封口袋收集后放置冰盒中储存备用。

      • 将200 g玫瑰花瓣样品分次用匀浆机匀浆,匀浆后样品在−18 ℃条件下保存。准确称取1.0000 g试样至50 mL具塞比色管中,加入提取液(无水乙醇、水和盐酸比例为2∶1∶1)定容至刻度,摇匀,静置1 min,超声提取30 min。超声提取后,于沸水浴中水解1 h,冷却至室温,用提取液再次定容至50 mL。静置后取上清液过0.45 μm微孔滤膜过滤,滤液上机分析,用峰面积进行外标法定量。

      • 分别称取一定质量飞燕草色素、矢车菊色素、天竺葵色素、芍药素、锦葵色素、矮牵牛色素标准品,用10%盐酸甲醇溶液溶解定容,配制成0.5~1 mg/mL的单标储备液,−18 ℃遮光保存。

      • 把单标储备液取用10%盐酸甲醇溶液最终配制为50.0 mg·L−1的混合标准工作液。每次将此混合标准工作液稀释成0.5 mg·L−1、1.0 mg·L−1、2.0 mg·L−1、3.0 mg·L−1、4.0 mg·L−1、5.0 mg·L−1的标准工作液,用于标准曲线的测定。

      • 色谱柱:Agilent ZORBAX SB-C18(5 μm)4.6 mm×250 mm;柱温:35 ℃;流动相:1%甲酸水溶液:1%甲酸乙腈溶液,流速:0.8 mL·min−1;检测器:DAD,波长:530 nm,进样量:20.0 μL,水相滤膜0.45 μm。梯度洗脱条件见表1

        表 1  流动相梯度洗脱条件

        Table 1.  Gradient elution conditions of the flow phase

        时间
        Time
        1%甲酸水溶液
        1% Formic acid solution
        1%甲酸乙腈溶液
        0.1% Formic
        Acid-Acetonitrlle
        流量
        rate of flow
        /(mL·min−1
        0.0092.08.00.8
        2.0092.08.00.8
        4.0088.012.00.8
        7.0082.018.00.8
        12.0080.020.00.8
        14.0075.025.00.8
        17.0070.030.00.8
        20.0055.045.00.8
        22.0020.080.00.8
        24.0092.08.00.8
        30.0092.08.00.8
      • 色谱的仪器检出限与仪器噪声和标准曲线斜率有关,噪声为峰高(LU),标准曲线为浓度和峰高的线性关系,具体公式如下:仪器检出限=3×仪器噪声÷标准曲线斜率;方法检出限=仪器检出限×50÷1.00(50:定容体积;1.00:称样量);定量线=3×方法检出限;利用2 mg/L的标准工作液色谱图计算噪声(ASTM),设定噪声计算时间为8~10 min。利用标准工作液的峰高得到标准曲线y=Ax+B,其中y为响应值,x为浓度,A为标准曲线斜率,B为常数项。

      • 将0.5 mg·L−1、1.0 mg·L−1、2.0 mg·L−1、3.0 mg·L−1、4.0 mg·L−1、5.0 mg·L−1的标准工作液按2.4项的色谱条件测定飞燕草色素、矢车菊色素、矮牵牛色素、天竺葵色素、芍药素、锦葵色素等6种花青素的峰面积。以标准品含量(mg·L−1)为横坐标(x),以峰面积为纵坐标(y)绘制标准曲线。

      • 回收率及重复性试验:精密称取空白样品3份(已测定不含这6种花青素的玫瑰花),每份约1.00 g,按50 mg·kg−1的含量进行加标,按2.1项进行定量并计算加样回收率。

      • 取供试样品适量,按上述方法测定不同开花时期大马士革III玫瑰花中飞燕草色素、矢车菊色素、矮牵牛色素、天竺葵色素、芍药素、锦葵色素等6种花青素的含量。

      • 称样量为1.0000 g,定容体积为50 mL,飞燕草色素、矢车菊色素、矮牵牛色素、天竺葵色素、芍药素、锦葵色素等6中花青素的方法检出限为0.11、0.13、0.18、0.14、0.10 和0.10 mg·kg−1;定量限为0.33、0.39、0.57、0.42、0.30和0.30 mg·kg−1

      • 按2.6的方法测试和计算得回归方程如下:飞燕草色素:Y=99.27X−2.47(r=0.9998);矢车菊色素:Y=125.78X−4.70(r=0.9998);矮牵牛色素:Y=100.79X−3.78(r=0.9995);天竺葵色素:Y=109.37X−1.10(r=0.9999);芍药素:Y=119.53X−2.09(r=0.9999);锦葵色素:Y=107.12X−3.19(r=0.9999)。以上结果表明,6种花青素的标准曲线线性均较好,能够满足测试需要。

      • 回收率试验结果见表2,6种花青素的加标回收率在63.8%~98.3%之间,平均加标回收率在64.2%~96.6%之间,加标回收的RSD分别为1.63%、1.87%、0.69%、0.34%、0.85%、0.56%,结果表明分析方法准确性良好。方法学考察结果表明该分析方法能够满足6种花青素的定量分析要求。

        表 2  6种花青素的加样回收率

        Table 2.  Recovery rate of 6 anthocyanins from samples

        花青素类型
        Anthocyanin type
        平均回收率
        Average Recovery/%
        相对标准偏差
        RSD/%
        飞燕草色素92.91.63
        矢车菊色素96.61.87
        矮牵牛色素91.10.69
        天竺葵色素88.00.34
        芍药素91.10.85
        锦葵色素84.20.56
      • 高效液相色谱法分析结果表明,大马士革III玫瑰4个不同开花时期(蕾期、初开期、盛开期和盛开末期)可以检测出常见6种花青素中的两种,即矢车菊色素和天竺葵色素,而飞燕草色素、矮牵牛色素、芍药素和锦葵色素未能检出(见表3)。

        表 3  不同开花时期大马士革III玫瑰花青素组分含量方差分析结果

        Table 3.  Variance analysis of anthocyanin contents from Rosa damascene tyigintipetala at different flowering periods

        花青素
        Anthocyanin
        蕾期
        Unfold-petal Stage
        初开期
        Initial-flowering Stage
        盛开期
        Full-flowering Stage
        盛开末期
        Flowering-wilting Stage
        飞燕草色素/(mg·kg−10.000.000.000.00
        矢车菊色素/(mg·kg−1156.43Aa131.45Bb104.05Cc84.17Dd
        矮牵牛色素/(mg·kg−10.000.000.000.00
        天竺葵色素/(mg·kg−14.92ABab5.23Aa4.68Bb3.63Cc
        芍药素0.000.000.000.00
        锦葵色素/(mg·kg−10.000.000.000.00
          注:采用LSD法对同一行的数据进行比较,同一行的不同小写字母表示差异显著(P<0.05),同一行的不同大写字母表示差异极显著(P<0.01)。

        方差分析结果表明不同开花时期大马士革III玫瑰矢车菊色素含量差异达到极显著水平(P<0.01),且矢车菊色素由蕾期开始往后,其含量逐渐降低,LSD多重比较结果显示,在4个不同开花时期矢车菊色素含量两两间差异均达到极显著水平(P<0.01)。

        天竺葵色素在初开期含量最高,蕾期和盛开期含量次之,盛开末期含量最低。方差分析结果表明不同开花时期大马士革III玫瑰天竺葵色素含量差异达到极显著水平(P<0.01),LSD多重比较结果表明,天竺葵色素在蕾期和初开期含量差异不显著(P<0.01),与盛开期和盛开末期相比含量差异均达到极显著水平(P<0.01),盛开期和盛开末期相比,天竺葵色素含量差异也达到极显著水平(P<0.01)。

        相关分析表明:检测出来的两种花青素(矢车菊色素、天竺葵色素)不同开花时期含量相关性不显著。

      • 目前,对植物花青素成分的提取的研究,主要采用甲醇热回流法,该方法具有能耗大,效率低,耗时,提取温度高等[14];其次为酶解提取,该法价格昂贵,对pH值、温度和作用时间等实验条件要求高,可用于提取的梅种类不多,限制了该工艺的推广和发展[15]。本试验以植物源性食品中主要花青素成分(飞燕草色素、矢车菊色素、矮牵牛色素、天竺葵色素、芍药素和锦葵色素)为指标成分,采用盐酸和甲醇作为溶剂超声提取的方法提取目标成分,超声处理能够加快花色苷的提取,使用强酸超声提取后可直接进行水解,避免了萃取过程中的损失,目标成分的提取效率较高,分离度较好。六种主要花青素测定的线性范围、线性相关系数、仪器检出限、方法检出限、定量限、精密度试验RSD值、回收率试验RSD值、重复性试验RSD值等均达到测定标准要求。该方法简便、快速、稳定且重现性好,研究结果表明应用新建立的HPLC法,可以满足大马士革Ⅲ玫瑰样品中和其他植物源性六类主要花青素成分分析测定要求。

      • 本研究发现大马士革Ⅲ玫瑰4个不同开花时期检出了矢车菊色素和天竺葵色素两种花青素,并且矢车菊色素含量在不同花期均占绝对优势,在开花过程中此两类花青素含量均随开花过程和花瓣褪色而降低,由此可以初步判定这两种花青素相应的糖苷是决定大马士革Ⅲ玫瑰花色的主要成分,开花过程中花色变化主要和矢车菊色素和天竺葵色素两种花青素相应的糖苷含量变化相关。两种花青素在初开期之前完成积累,随着花朵开放不再合成,只是逐步降解。花青苷随花朵开放含量降低,可能是因为随着花朵的开放,花瓣逐渐展开,花瓣受光面积增大,光照影响了花青苷的稳定性,使其逐步降解,从而导致含量逐步降低。

      • 植物花色是观赏植物重要的性状之一,花色改良一直是园艺工作者重要的育种目标之一[16]。植物的花色不仅在吸引传粉者、为植物的授粉和繁衍后代方面起到重要作用,也为植物提供了五色斑斓的色彩,具有重要美学价值[17-18]。月季(Rosa chinenis)、玫瑰(Rosa rugosa)和野蔷薇(Rosa multiflora)是蔷薇科(Rosaceae)蔷薇属(Rosa L.)的3个物种。与大马士革Ⅲ玫瑰同属的月季花色丰富,包括红、朱红、粉、橙白、蓝紫、复色、混色各种色系,可以形成一个连接不断的环形色谱图,是开展花色研究的良好材料。相关的研究也表明,月季品种花青苷种类以天竺葵素和矢车菊素相应的糖苷为主,有些品种也富含芍药素糖苷[19-20],与本研究的结果一致。后续的研究将围绕大马士革Ⅲ及其相关近缘月季品种的花色表型及其色素分析开展,同时研究花青苷代谢途径的分子调控机理,这些工作对于准确反映蔷薇属植物花色多样性及花青苷的分布特点具有重要意义,同时也为探讨大马士革玫瑰花色的呈色机理和花色育种提供参考。

    参考文献 (20)

    目录

      /

      返回文章
      返回