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夏枯草(Prunella vulgaris L.)为唇形科夏枯草属植物,是一种重要的多年生药用植物,在全国各地均有分布,主产于四川、陕西、甘肃、江苏、浙江、安徽、河南等省,国外主要分布在欧洲、北非、西亚、印度、北美洲等地[1]。夏枯草作为一种传统的中药,在中国有多年的使用历史。传统的中医学理论认为夏枯草味道苦涩而且辣性冷,具有消肿、抗发热和镇静的作用[2,3]。现代临床研究表明,夏枯草具有广泛的生物学效应,包括抗病毒、抗炎、抗氧化和抗肿瘤活性[4-7]。除药用外,夏枯草也被应用于凉茶和食品中[8]。
研究表明,夏枯草中含有多种类型的化学成分,目前从中已分离出萜类、甾醇类、酚酸类、黄酮类、挥发油及糖类等多种化学成分[9]。迷迭香酸-3-O-葡萄糖苷(Rosmarinic acid-3-O-glucoside)作为夏枯草的特征成分[10,11],已被人们广泛研究。药理学研究表明,迷迭香酸-3-O-葡萄糖苷都具有广泛的生物活性,如抗氧化、抗菌、抗病毒和抗肿瘤等[12-14]。
超声细胞破碎辅助提取是近些年来发展起来的新技术,拥有操作简单,提取时间短和溶剂消耗少的特点,已经成功应用于很多中药植物活性成分的提取[15]。本实验将超声探头直接接触植物组织与提取溶剂,对夏枯草中迷迭香酸-3-O-葡萄糖苷的提取工艺进行研究,为中药夏枯草资源的深度开发提供技术基础。
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夏枯草购于安徽亳州市大西北药业有限责任公司,经东北林业大学谷会岩教授鉴定,用粉碎机粉碎,过60~80目备用。
迷迭香酸-3-O-葡萄糖苷(纯度98%,成都瑞芬思生物科技有限公司),甲醇(色谱级,赛莫非世尔科技(中国)有限公司),乙醇(分析级,天津市天士力化学试剂有限公司)。
高效液相色谱仪(安捷伦Agilent 1260),超声波细胞破碎仪(型号JY92-IID)。
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对迷迭香酸-3-O-葡萄糖苷进行HPLC定量分析,色谱条件为:Agilent 5 TC-C18色谱柱(5 μm,4.6 mm × 250 mm),检测波长315 nm,柱温25 ℃,进样量10 μL,流速为1 mL·min−1;流动相体系为0.2 %磷酸-甲醇(60∶40),等度洗脱30 min。
按照上述色谱条件,配制系列浓度(0.1 mg·mL−1、0.2 mg·mL−1、0.3 mg·mL−1、0.4 mg·mL−1和0.5 mg·mL−1)的迷迭香酸-3-O-葡萄糖苷对照品溶液,HPLC检测,线性拟合得到回归方程分别为:
$$ Y = {\rm{ }}58\;218x + {\rm{ }}2.0037,\;{R^2} = {\rm{ }}0.9999 $$ (1) 式中: x为对照品的浓度(mg·mL−1),Y为峰面积
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称取夏枯草粉末0.5g,于10 mL 50%乙醇中超声提取10 min。过滤得粗提液。取粗提液2 mL过0.45 μm微孔滤膜,HPLC检测得目标产物峰面积,代入回归方程得到产物浓度。产物得率计算公式为:
$$Y = \frac{{cv}}{m}$$ (2) 式中:Y为产物的率(mg·g−1);c为粗提液浓度(mg·mL−1);v粗提液为体积(mL);m为夏枯草粉末质量(g)
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根据迷迭香酸类物质的稳定性,实验选取乙醇作为提取溶剂[16]。精确称取夏枯草粉末0.5 g于容器中,在不同条件下进行超声辅助提取,计算得率。分别考察乙醇体积分数、液料比、空化时间、缓冲时间、超声功率和提取时间对目标产物得率的影响。
Ultrasonic-Assisted Extraction of Rosmarinic Acid-3-O-glucoside from the Fruit-spikes of Prunella vulgaris L.
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摘要: 研究以夏枯草果穗为原料,采用超声细胞破碎辅助提取夏枯草中的迷迭香酸-3-O-葡萄糖苷,通过高效液相色谱法进行定量分析,得到的最佳提取条件为以50%乙醇为提取剂,液料比25 mL·g−1,空化时间1.5 s,缓冲时间2.0 s,超声功率300 W,超声时间7 min,迷迭香酸-3-O-葡萄糖苷的得率为0.71 mg·g−1。与传统提取方法相比,超声法具有稳定、高效、节能的优点。
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关键词:
- 夏枯草;
- 超声辅助提取;
- 迷迭香酸-3-O-葡萄糖苷
Abstract: In this study, the fruit-spikes of Prunella vulgaris L. were used as raw materials to extract rosmarinic acid-3-O-glucoside by ultrasonic cell grinder extraction and the content was determined by HPLC. Through the investigation of various factors, the best extraction conditions were as follows: 50% ethanol as extraction agent, liquid-solid ratio of 25 mL·g−1, cavitation time of 1.5 s, buffer time of 2.0 s, ultrasonic irradiation power of 300 W, ultrasonic irradiation time of 7 min. Under the optimum conditions, the yield of rosmarinic acid-3-O-glucoside was 0.71 mg·g−1. Compared with the traditional extraction method, ultrasonic-assisted extraction has the advantages of stability, high efficiency and energy saving. -
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