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草珊瑚(Sarcandra glabra Nakai),俗称满山香、观音茶、接骨木、九节茶等,是金栗兰科多年生常绿亚灌木,主要分布于我国长江以南各省区及东南亚等地[1]。草珊瑚是常用中药材,具有清热凉血、活血消斑、祛风通络之功效,临床上常用于血热发斑发疹、风湿痹痛、跌打损伤等[2]。同时其形态秀丽、四季馨香,具有极高的食用及观赏价值,草珊瑚适应性强,既可制作清雅小巧的盆栽,置于室内观赏,也可用于园林、庭院的绿化点缀[3]。
全国草珊瑚干品药材原料的需求量每年达万吨以上[4],随着草珊瑚需求的日益增加和野生资源减少,近年来在江西、福建、广西等地开始进行人工林下栽培[5]。种苗是草珊瑚扩大种植规模的关键。目前,草珊瑚主要采用播种、分株、扦插等方式进行栽培繁殖。种子苗存在变异,幼苗规格大小不一,而且还受育种时间、育种环境和材料多少的限制;硬枝扦插、分株繁殖受育苗时间、育种环境和材料多少的限制;而组织培养则不受时间和空间的限制,繁殖速度快,一年四季都可以批量生产优质健康、遗传特性一致的草珊瑚苗木[6-8]。目前,草珊瑚外植体消毒、接种与初代培养、继带与生根培养、炼苗驯化等方面已取得很多研究成果[9-11],一般采用MS为基本培养基,本研究比较了MS、1/2MS、B5、ER培养基的诱导效果,并对草珊瑚组织培养各个环节进行系统研究,建立草珊瑚组培快繁技术体系,可为草珊瑚的组培工厂化育苗和产业化发展利用提供技术服务。
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试验结果表明,顶芽+嫩茎作为外植体接种后感染率低,但死亡率极高,半木质化基部茎段感染率较高,但死亡率低;4—5月取样的外植体感染率和死亡率最低,7—10月取样接种的外植体感染率和死亡率最高,因此,建立无菌株的外植体应选用4—5月木质化程度较高且较粗壮的半木质化枝条的基部茎段。
表 1 草珊瑚不同取样时间和接种部位感染率与死亡率一览表
Table 1. Infection rate and mortality rate at different sampling times and inoculation sites of Sarcandra glabra
取样时间
Sampling time接种部位
Inoculation sites感染率/%
Infection rate死亡率/%
Mortality rate4—5月 顶芽+嫩茎 11.70 91.20 基部茎段 37.10 7.10 7—8月 顶芽+嫩茎 35.30 100.00 基部茎段 92.30 11.70 9—10月 顶芽+嫩茎 26.00 92.50 基部茎段 66.70 10.00 -
将无菌株接种于不同激素配比的4种基本培养基中进行诱芽培养,结果表明4种培养基均能诱导草珊瑚出芽。1/2MS培养基诱导的芽弱,叶色淡,且叶柄与茎段连接处容易产生白色愈伤从而使叶柄断裂;MS和ER培养基中的茎段诱芽率较低,叶柄处容易变黑导致整株变黑死亡;B5培养基对草珊瑚诱芽效果较好。因此,草珊瑚最佳诱芽培养基为B5+0.8 mg·L−1 6-BA+0.3 mg·L−1 NAA。
表 2 四种基本培养基诱导成芽结果统计
Table 2. Statistics results on bud formation induced by four basic culture medium
处理
号No.基本培养
基Basic
medium6-BA
mg·L−1NAA
mg·L−1诱芽率/%
Bud formation生长状况
Growth status1组 MS 0.4 0.3 78.00 芽长势慢,易变黑死亡 2组 MS 0.8 0.3 80.00 易变黑死亡 3组 1/2MS 0.4 0.3 72.00 单芽,叶色偏黄 4组 1/2MS 0.8 0.3 74.00 长势差,叶色偏黄 5组 B5 0.4 0.3 84.00 芽长势慢 6组 B5 0.8 0.3 83.00 芽壮,叶绿长势好, 7组 ER 0.4 0.3 74.00 芽小易变黑死亡 8组 ER 0.8 0.3 78.00 芽小易变黑死亡 -
以不同激素配比的改良B5诱导无菌芽进行增殖培养,由表3和图1可以看出,草珊瑚在没加入活性炭(AC)的培养基中,芽的增殖系数随6-BA的增加而增加,而芽的高度在6-BA小于4 mg·L−1时变化不大,当浓度大于4 mg·L−1时,高度则随6-BA浓度的增大而变矮,植株叶子泛黄变小且较脆,茎节变短粗,植株不长高。由表3和图2可以看出,草珊瑚在加入1 mg·L−1 AC的培养基中,芽的增殖系数和高度随6-BA的增加变化不大,与不加AC相比,能明显增加植株的高度,而且植株容易生根,适合生根之前的壮苗培养。综上所述,AC=0 mg·L−1,B5+3.0 mg·L−1 BA+0.5 mg·L−1 NAA培养基对芽的增殖系数和株高等综合表现最好,是草珊瑚增殖继代最佳培养基配方。
图 1 不同增殖培养基诱导草珊瑚增殖系数
Figure 1. Proliferation coefficient of sarcandra glabra induced by different culture medium
表 3 草珊瑚增殖试验结果统计
Table 3. Statistics results on proliferation test of sarcandra glabra
编号
No.6-BA
mg·L−1NAA
mg·L−1AC=0 g·L−1 AC=1 g·L−1 平均增殖系数
Proliferation coefficient平均芽高/cm
Bud height/cm生长状况
Growth status平均增殖系数
Proliferation coefficient平均芽高/cm
Bud height/cm生长状况
Growth status1组 1.0 0.2 3.09 1.67 茎粗短 2.18 2.98 芽少苗高生根现象 2组 1.0 0.5 3.27 1.98 茎粗长势好 2.09 3.17 芽少苗高生根现象 3组 2.0 0.2 4.55 2.12 叶小茎粗 1.91 3.27 芽少苗高生根现象 4组 2.0 0.5 4.27 2.95 叶较大茎粗 2.09 2.75 芽少苗高生根现象 5组 3.0 0.2 6.55 2.72 叶较大茎粗 2.46 2.90 芽少苗高生根现象 6组 3.0 0.5 6.82 2.98 长势好 2.09 3.02 芽少苗高生根现象 7组 4.0 0.2 7.46 0.74 叶小、芽成簇无长势 2.36 2.73 芽少有生根现象 8组 4.0 0.5 7.27 0.79 叶小茎粗无长势 2.27 2.70 芽少有生根现象 9组 5.0 0.5 10.64 0.68 叶小叶黄茎粗芽成簇 2.18 2.63 芽少有生根现象 -
从表4可以看出,各因数水平组合间的生根情况无较大差异,几乎无侧根和须根,叶色油绿。随着NAA、IBA浓度的增加生根率增加,茎变粗,叶变大。综合比较,3组培养基诱导生根率达到100%,平均生根数大于6.5条,生根质量好,生根整齐,根茎较粗,叶较大,所以1/2B5+0.1 mg·L−1 NAA+0.8 mg·L−1 IBA培养基为草珊瑚生根培养最佳培养基。
表 4 草珊瑚生根培养试验结果统计
Table 4. Statistics results of root culture test of Sarcandra glabra
编号
No.基本培养基
Basic mediumNAA
mg·L−1IBA
mg·L−1生根率/%
Rooting rate /%平均生根数/条
Rooting number平均株高/cm
Plant height/cm生长状况
Growth status1组 1/2B5 0.1 0.4 95.50 4.56 3.83 茎粗,叶大 2组 1/2B5 0.1 0.6 98.00 5.16 3.72 茎较粗,叶大 3组 1/2B5 0.1 0.8 100.00 6.51 3.51 茎较粗壮,根较粗,叶大 4组 1/2B5 0.2 0.4 98.50 4.40 3.22 茎粗壮,叶较大 5组 1/2B5 0.2 0.6 100.00 3.88 3.92 茎粗,叶较大 6组 1/2B5 0.2 0.8 100.00 4.98 3.93 茎较壮,根较粗、叶较大 7组 1/2B5 0 0.8 92.50 3.48 4.82 茎细、根细长、叶小 8组 1/2B5 0 1.0 94.00 3.07 4.58 茎细、根细长、叶小 -
从表5可以看出草珊瑚组培苗在4组基质中炼苗移栽成活率最高,成活率达94%,生长状况好,叶大,苗子长势壮。所以4组腐殖土∶椰糠∶珍珠岩∶泥土=5∶2∶1∶2组合基质为草珊瑚移栽最佳基质。
表 5 草珊瑚炼苗移栽试验结果统计
Table 5. Statistics results on acclimatization and transplant of Sarcandra glabra
编号
No.腐殖土
humus
soil椰糠
Coconut bran珍珠岩
Perlite泥土
Soil成活率
survival
ratio/%生长情况
Growth status1组 9 0 1 0 78.33 苗弱,叶色偏黄 2组 8 0 1 1 85.67 苗较壮,叶色偏绿, 3组 7 1 1 1 92.67 苗较壮,叶色绿, 4组 5 2 1 2 94.00 苗壮,叶色绿、长势快 5组 5 3 1 1 88.33 苗较壮,叶小,叶绿 6组 6 0 1 3 81.67 苗较壮,叶小,叶绿 7组 10 0 0 0 80.67 苗弱,叶小,叶色偏黄
A Study of Tissue Culture and Rapid Propagation of Sarcandra glabra
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摘要: 4—10月分别剪取草珊瑚当年生带腋芽的半木质化枝条作为外植体,开展组织培养试验研究。结果表明:草珊瑚最理想的外植体为4—5月半木质化枝条的基部茎段;外植体最佳诱导培养基为B5+0.8 mg·L−1 6-BA+0.3 mg·L−1 NAA;最佳增殖培养基为B5+3.0 mg·L−1 6-BA+ 0.5 mg·L−1 NAA,平均增殖系数为6.82;最佳生根培养基为1/2B5+0.8 mg·L−1 IBA+0.1 mg·L−1 NAA,生根率为100%,根数可达6.51;以腐殖土∶椰糠∶珍珠岩∶泥土=5∶2∶1∶2为移栽基质,移栽成活率可达94%,组培苗长势好,叶色浓绿,植株健壮。Abstract: From April to October, the semi-lignified current-year branches with axillary buds of Sarcandra glabra were cut every month as explants to carry out tissue culture experiments. The results showed that (1) the best ideal explants of Sarcandra glabra was the base stem segment of semi-lignified branches from April to May. (2) The best incubation medium for explants was B5 + 0.8 mg·L−1 6-BA + 0.3mg·L−1 NAA. The best proliferation medium was B5 + 3.0mg·L−1 6-BA + 0.5 mg·L−1 NAA, with an average proliferation coefficient of 6.82. The best rooting medium was 1/2B5 + 0.8 mg·L−1 IBA + 0.1mg·L−1 NAA, the rooting rate was 100%, and the average number of roots was 6.51. (3) With humus soil: coconut husk: perlite: soil = 5:2:1:2 as the transplant substrate, the transplant average survival rate was 94%, the tissue culture seedlings grew well, with thick green leaves and strong plants.
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Key words:
- Sarcandra glabra Nakai;
- Tissue culture;
- Rapid propagation
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表 1 草珊瑚不同取样时间和接种部位感染率与死亡率一览表
Tab. 1 Infection rate and mortality rate at different sampling times and inoculation sites of Sarcandra glabra
取样时间
Sampling time接种部位
Inoculation sites感染率/%
Infection rate死亡率/%
Mortality rate4—5月 顶芽+嫩茎 11.70 91.20 基部茎段 37.10 7.10 7—8月 顶芽+嫩茎 35.30 100.00 基部茎段 92.30 11.70 9—10月 顶芽+嫩茎 26.00 92.50 基部茎段 66.70 10.00 表 2 四种基本培养基诱导成芽结果统计
Tab. 2 Statistics results on bud formation induced by four basic culture medium
处理
号No.基本培养
基Basic
medium6-BA
mg·L−1NAA
mg·L−1诱芽率/%
Bud formation生长状况
Growth status1组 MS 0.4 0.3 78.00 芽长势慢,易变黑死亡 2组 MS 0.8 0.3 80.00 易变黑死亡 3组 1/2MS 0.4 0.3 72.00 单芽,叶色偏黄 4组 1/2MS 0.8 0.3 74.00 长势差,叶色偏黄 5组 B5 0.4 0.3 84.00 芽长势慢 6组 B5 0.8 0.3 83.00 芽壮,叶绿长势好, 7组 ER 0.4 0.3 74.00 芽小易变黑死亡 8组 ER 0.8 0.3 78.00 芽小易变黑死亡 表 3 草珊瑚增殖试验结果统计
Tab. 3 Statistics results on proliferation test of sarcandra glabra
编号
No.6-BA
mg·L−1NAA
mg·L−1AC=0 g·L−1 AC=1 g·L−1 平均增殖系数
Proliferation coefficient平均芽高/cm
Bud height/cm生长状况
Growth status平均增殖系数
Proliferation coefficient平均芽高/cm
Bud height/cm生长状况
Growth status1组 1.0 0.2 3.09 1.67 茎粗短 2.18 2.98 芽少苗高生根现象 2组 1.0 0.5 3.27 1.98 茎粗长势好 2.09 3.17 芽少苗高生根现象 3组 2.0 0.2 4.55 2.12 叶小茎粗 1.91 3.27 芽少苗高生根现象 4组 2.0 0.5 4.27 2.95 叶较大茎粗 2.09 2.75 芽少苗高生根现象 5组 3.0 0.2 6.55 2.72 叶较大茎粗 2.46 2.90 芽少苗高生根现象 6组 3.0 0.5 6.82 2.98 长势好 2.09 3.02 芽少苗高生根现象 7组 4.0 0.2 7.46 0.74 叶小、芽成簇无长势 2.36 2.73 芽少有生根现象 8组 4.0 0.5 7.27 0.79 叶小茎粗无长势 2.27 2.70 芽少有生根现象 9组 5.0 0.5 10.64 0.68 叶小叶黄茎粗芽成簇 2.18 2.63 芽少有生根现象 表 4 草珊瑚生根培养试验结果统计
Tab. 4 Statistics results of root culture test of Sarcandra glabra
编号
No.基本培养基
Basic mediumNAA
mg·L−1IBA
mg·L−1生根率/%
Rooting rate /%平均生根数/条
Rooting number平均株高/cm
Plant height/cm生长状况
Growth status1组 1/2B5 0.1 0.4 95.50 4.56 3.83 茎粗,叶大 2组 1/2B5 0.1 0.6 98.00 5.16 3.72 茎较粗,叶大 3组 1/2B5 0.1 0.8 100.00 6.51 3.51 茎较粗壮,根较粗,叶大 4组 1/2B5 0.2 0.4 98.50 4.40 3.22 茎粗壮,叶较大 5组 1/2B5 0.2 0.6 100.00 3.88 3.92 茎粗,叶较大 6组 1/2B5 0.2 0.8 100.00 4.98 3.93 茎较壮,根较粗、叶较大 7组 1/2B5 0 0.8 92.50 3.48 4.82 茎细、根细长、叶小 8组 1/2B5 0 1.0 94.00 3.07 4.58 茎细、根细长、叶小 表 5 草珊瑚炼苗移栽试验结果统计
Tab. 5 Statistics results on acclimatization and transplant of Sarcandra glabra
编号
No.腐殖土
humus
soil椰糠
Coconut bran珍珠岩
Perlite泥土
Soil成活率
survival
ratio/%生长情况
Growth status1组 9 0 1 0 78.33 苗弱,叶色偏黄 2组 8 0 1 1 85.67 苗较壮,叶色偏绿, 3组 7 1 1 1 92.67 苗较壮,叶色绿, 4组 5 2 1 2 94.00 苗壮,叶色绿、长势快 5组 5 3 1 1 88.33 苗较壮,叶小,叶绿 6组 6 0 1 3 81.67 苗较壮,叶小,叶绿 7组 10 0 0 0 80.67 苗弱,叶小,叶色偏黄 -
[1] 温柔,李潮,严丽萍,等. 基于多指标评价优选草珊瑚炮制工艺[J]. 中草药,2019,50(12):2868−2875. doi: 10.7501/j.issn.0253-2670.2019.12.019 [2] 中华人民共和国药典委员会. 中国药典(2015 版第一部)[M]. 北京: 中国医药科技出版社, 2015: 223. [3] 杨城,王冉,王玥,等. 光照强度对草珊瑚光合特性的影响[J]. 林业与环境科学,2019,35(4):84−89. doi: 10.3969/j.issn.1006-4427.2019.04.014 [4] 徐志杰. 草珊瑚的研究概况[J]. 江西中医学院学报,1994,6(1):36−37. [5] 黄亮. 草珊瑚林间套种栽培研究[J]. 闽西职业技术学院学报,2010,12(3):100−102. doi: 10.3969/j.issn.1673-4823.2010.03.025 [6] 吴南生,聂小林,钟彬林,等. 草珊瑚栽培技术[J]. 江苏林业科技,2001,28(3):40−41. doi: 10.3969/j.issn.1001-7380.2001.03.016 [7] 李基生. 草珊瑚扦插育苗试验[J]. 基础医学,2013(9):119−120. [8] 黎颖菁. 草珊瑚的组织培养及植株再生研究[J]. 食品与药品,2008,10(1):32−34. doi: 10.3969/j.issn.1672-979X.2008.01.009 [9] 赵会芳,等. 草珊瑚的组织培养技术研究进展[J]. 农技服务,2017,4(34):22−23. [10] 朱淑颖,张海洋,杨志红,等. 草珊瑚试管苗生根培养研究[J]. 安徽农业科学,2010,38(28):15545−15547. doi: 10.3969/j.issn.0517-6611.2010.28.038 [11] 黎颖菁. 草珊瑚的组织培养与植株再生研究[D]. 广西大学, 2008.